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γ-谷氨酰轉肽酶（γ-GT）試劑盒說明書
微量法 100T/96S
γ-GT 是γ-谷氨酰循環中的關鍵酶，催化GSH 降解。γ-GT 催化GSH 或者其他γ-谷氨酰基化合物上的γ-谷氨酰基轉移到受體。也可以催化 GSH 和其他γ-谷氨酰基化合物的水解，產生谷an酸鹽，在細胞外谷胱gan肽新陳代謝中起了重要的作用。
γ-GT 催化谷氨酰對硝基苯胺中γ-谷氨酰基轉移給 N-甘an酰甘an酸，生成對硝基苯胺，在 405nm 有特征光吸收；通過測定 405nm 光吸收增加速率，來計算γ-GT 酶活性。
產品名稱 | BV6014-100T/96S | Storage |
試劑一：液體 | 100ml | 4℃ |
試劑二：粉劑 | 1 瓶 | 4℃ |
試劑三：液體 | 4ml | 4℃ |
試劑四：液體 | 14.8ml | 4℃ |
說明書 | 一份 | |
工作液（在試劑二瓶中配制）：臨用前配制，把試劑三倒入試劑二瓶中，充分溶解（室溫過低時可以40℃水浴促進溶解）；然后把試劑四倒入試劑二瓶中，混勻后室溫保存。
具體產品的參數以收到產品說明書的參數為準
低溫離心機、水浴鍋、可調節移液器、可見分光光度計/酶標儀、微量玻璃比色皿/96 孔板、和蒸餾水
1. 組織：按照組織質量（g）：試劑一體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1ml 試劑一）進行冰浴勻漿。8000g，4℃離心 15min，取上清，置冰上待測。
2. 細菌、真菌：按照細胞數量（104 個）：試劑一體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細胞加入 1ml 試劑一），冰浴超聲波破碎細胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時間 3min）；然后 8000g， 4℃，離心 15min，取上清置于冰上待測。
3. 血清等液體：直接測定。
1. 分光光度計/酶標儀預熱 30min，調節波長到 405 nm，蒸餾水調零。
2. 試劑二置于 25℃（一般物種）或者 37℃（哺乳動物）水浴中預熱 30min（保證無沉淀）。
3. 測定管：取微量玻璃比色皿或 96 孔板，依次加入 20μl 上清液，180μl 工作液，混勻后于 405nm 測定 10s和 70s 時吸光度，記為 A1 和A2。
標準曲線：y=0.006x+0.0016，x 為對硝基苯胺濃度，y 為吸光值，R2=0.999。
(1). 按蛋白濃度計算
活性單位定義：25℃或者 37℃中，每毫克蛋白每分鐘催化產生 1μmol 對硝基苯胺為 1 個酶活單位。
γ-GT（μmol/min/mg prot）=[ (A2－A1)－0.0016]÷0.006×V 反總÷（Cpr×V 樣）÷T
=1.67 × [ (A2－A1)－0.0016] ÷ Cpr
(2). 按樣本質量計算
活性單位定義：25℃或者 37℃中，每克樣本每分鐘催化產生 1μmol 對硝基苯胺為 1 個酶活單位。
γ-GT（μmol/min/g 鮮重）=[ (A2－A1)－0.0016]÷0.006×V 反總÷(W×V 樣÷V 樣總)÷T
=1.67 × [ (A2－A1)－0.0016] ÷W
（3） 按細胞數量計算
活性單位定義：25℃或者 37℃中，每 104 個細胞每分鐘催化產生 1μmol 對硝基苯胺為 1 個酶活單位。
γ-GT（μmol/min/104 cell）=[ (A2－A1)－0.0016]÷0.006×V 反總÷(細胞數量×V 樣÷V 樣總)÷T
=1.67 × [ (A2－A1)－0.0016] ÷細胞數量
（4） 按液體體積計算
活性單位定義：25℃或者 37℃中，每毫升液體每分鐘催化產生 1μmol 對硝基苯胺為 1 個酶活單位。
γ-GT（μmol/min/ml）= [ (A2－A1)－0.0016]÷0.006×V 反總÷V 樣÷T
= 1.67 × [ (A2－A1)－0.0016]
V 反總：反應體系總體積（L），200μl=2×10-4L；Cpr：蛋白濃度（mg/ml）；W ：樣品質量；V 樣：反應體系中加入上清液體積（ml），20μl=0.02 ml；V 樣總：提取液體積，1 ml；T：反應時間（min），1min。
標準曲線：y=0.003x+0.0016，x 為對硝基苯胺濃度，y 為吸光值，R2=0.999。
(1). 按蛋白濃度計算
活性單位定義：25℃或者 37℃中，每毫克蛋白每分鐘催化產生 1μmol 對硝基苯胺為 1 個酶活單位。
γ-GT（μmol/min/mg prot）=[ (A2－A1)－0.0016]÷0.003×V 反總÷（Cpr×V 樣）÷T
=3.34× [ (A2－A1)－0.0016] ÷ Cpr
(2). 按樣本質量計算
活性單位定義：25℃或者 37℃中，每克樣本每分鐘催化產生 1μmol 對硝基苯胺為 1 個酶活單位。
γ-GT（μmol/min/g 鮮重）=[ (A2－A1)－0.0016]÷0.003×V 反總÷(W×V 樣÷V 樣總)÷T
=3.34 × [ (A2－A1)－0.0016] ÷W
（3） 按細胞數量計算
活性單位定義：25℃或者 37℃中，每 104 個細胞每分鐘催化產生 1μmol 對硝基苯胺為 1 個酶活單位。
γ-GT（μmol/min/104 cell）=[ (A2－A1)－0.0016]÷0.003×V 反總÷(細胞數量×V 樣÷V 樣總)÷T
=3.34 × [ (A2－A1)－0.0016] ÷細胞數量
（4） 按液體體積計算
活性單位定義：25℃或者 37℃中，每毫升液體每分鐘催化產生 1μmol 對硝基苯胺為 1 個酶活單位。
γ-GT（μmol/min/ml）= [ (A2－A1)－0.0016]÷0.003×V 反總÷V 樣÷T
= 3.34 × [ (A2－A1)－0.0016]
V 反總：反應體系總體積（L），200μl=2×10-4L；Cpr：蛋白濃度（mg/ml）；W ：樣品質量，g；V 樣：反應體系中加入上清液體積（ml），20μl=0.02 ml；V 樣總：提取液體積，1 ml；T：反應時間（min）， 1min。
1. 培養細胞中γ-GT 活性測定時，細胞數目須在 300 萬-500 萬之間，細胞中γ-GT 的提取時可加試劑一后研磨或超聲波處理，不能用細胞裂解液處理細胞（防止因為蛋白質變性導致酶失活）。
2. 配置好的工作液 2 周內使用完畢。
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