單胺氧化酶（Monoamine Oxidase，MAO）試劑盒說明書

分光光度法 50 管/48 樣

正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定測定意義：

MAO(EC1.4.3.4) 主要存在于脊椎動物的各種器官，特別是分泌腺、腦、肝臟，在無脊椎動物、豆類的芽等植物中也存在催化單胺類物質(zhì)代謝，含量較低，具有重要的生理功能，其活性能反映肝纖維化的程度。此外，MAO 活性異常導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)運轉(zhuǎn)出現(xiàn)紊亂，從而引發(fā)多種病癥。

測定原理：

MAO 催化單胺類底物脫氨生成相應(yīng)的醛，進(jìn)一步氧化成酸；底物在 360nm 處有特征吸收峰，測定360nm 光吸收下降的速率，計算MAO 活性。

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試劑組成和配制：

需自備儀器和用品：

天平、低溫離心機、可見分光光度計、1 ml 玻璃比色皿、蒸餾水。

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說明書的參數(shù)為準(zhǔn)

粗酶液取：

1、組織：

按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1ml 提取液一）進(jìn)行冰浴勻漿，10000g，4℃，離心 10min，棄沉淀；把上清轉(zhuǎn)移到另一預(yù)冷的離心管，10000g，4℃，離心 30min，棄上清；加入 1.0 ml 預(yù)冷的提取液二，震蕩混勻，16000g，4℃，離心 40min，棄上清；沉淀加入預(yù)冷的 1.0 ml 試劑一，震蕩混勻，即粗酶液（可用于可溶性蛋白濃度測定）取上清置于冰上待測。

2、細(xì)菌、真菌：

按照細(xì)胞數(shù)量（104 個）：提取液體積（ml）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細(xì)胞加入 1ml 提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時間 3min）；然后 10000g，4℃，離心 10min，棄沉淀；把上清轉(zhuǎn)移到另一預(yù)冷的離心管，10000g，4℃，離心 30min，棄上清；加入 1.0 ml預(yù)冷的提取液二，震蕩混勻，16000g，4℃，離心 40min，棄上清；沉淀加入預(yù)冷的 1.0 ml 試劑一，震蕩混勻，即粗酶液（可用于可溶性蛋白濃度測定），取上清置于冰上待測。

3、血清：直接測定。

測定步驟：

混勻，1 ml 玻璃比色皿，對照管調(diào)零，測定 360nm 處吸光值A1，然后 37℃水浴 60min，測定 360nm處吸光值A2，△A= A1- A2。注意：空白管只需測定一次。

MAO 活性計算公式 ：

1、按蛋白含量計算

酶活定義：37℃，pH7.6 時，每毫克蛋白質(zhì) 1min 內(nèi)轉(zhuǎn)化 1nmol 底物的酶量為一個酶活單位。

DAO 活性（nmol/min / mg prot）= 2、按樣本質(zhì)量計算

e′ d ×V 反總÷（V 樣×Cpr）÷T= 114×ΔA÷Cpr

酶活定義：37℃，pH7.6 時，每克樣品 1min 內(nèi)轉(zhuǎn)化 1nmol 底物的酶量為一個酶活單位。

DAO 活性（nmol/min / g 鮮重）=e′ d ×V 反總÷（V 樣÷V 樣總×W）÷T = 114×ΔA÷ W 3、按照細(xì)胞數(shù)量計算

酶活定義：37℃，pH7.6 時，每 104 個細(xì)胞 1min 內(nèi)轉(zhuǎn)化 1nmol 底物的酶量為一個酶活單位。

DAO 活性（nmol/min / 104 cell）=

= 114×ΔA÷細(xì)胞數(shù)量 4、按照液體體積計算

e′ d ×V 反總÷（V 樣÷V 樣總×細(xì)胞數(shù)量）÷T

酶活定義：37℃，pH7.6 時，每升血清 1min 內(nèi)轉(zhuǎn)化 1nmol 底物的酶量為一個酶活單位。

DAO 活性（nmol/min /L）=e′ d ×V 反總÷V 樣=114000×ΔA

ε：底物摩爾消光系數(shù)，1.46 L/mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V 反總：反應(yīng)總體積，1ml；V 樣：反應(yīng)中樣本體積，0.1ml；V 樣總：加入提取液體積，1ml；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ml；T：反應(yīng)時間，60min， W：樣本質(zhì)量，g

注意事項:

1、吸光度變化應(yīng)該控制在 0.01~0.8 之間。否則加大樣品量或稀釋樣品，注意計算公式中參與計算的稀釋倍數(shù)要相應(yīng)改變。

2、樣品蛋白質(zhì)含量需要另外測定。

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