蔗糖酶（sucrase）試劑盒說明書

微量法 100 管/48 樣

正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定測定意義：

蔗糖酶（EC 3.2.1.26）是碳水化合物消化吸收的關鍵酶之一，能夠水解蔗糖變成相應的單糖而被機體吸收。

測定原理：

本試劑盒采用 3.5－二硝基水楊酸法測定蔗糖酶催化產生的還原糖的含量，由此可得出蔗糖酶水解速度。其原理是 3.5－二硝基水楊酸與還原糖共熱被還原成棕紅色的氨基化合物，在一定范圍內還原糖的量和反應液的顏色深度成正比。此法操作簡便、迅速、雜質干擾較小。

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組成：

試劑二：粉劑×1 支 ，4℃保存，用時加入 1ml 蒸餾水充分溶解待用；用不完的試劑 4℃保存；

自備儀器和用品：

可見分光光度計/酶標儀、沸水浴、移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研缽、冰和蒸餾水。

樣品測定的準備：

按照組織質量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1ml 提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

測定步驟：

1、分光光度計或酶標儀預熱 30min 以上，調節波長至 520nm，蒸餾水調零。

2、樣本測定，（在EP 管中依次加入下列試劑）：

置于 25℃準確水浴 10min

混勻， 95℃水浴 5min 左右（蓋緊，防止水分散失），冷卻至室溫

混勻，取 200μl 至微量石英比色皿或 96 孔板中測定各管 520nm 吸光值，ΔA=A 測定-A 對照，每個測定管需設一個對照管。

具體產品的參數以收到產品說明書的參數為準

蔗糖酶活力計算：

a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下

1、標準條件下測定的回歸方程為 y = 0.1296x -0.12；x 為標準品濃度（mg/ml），y 為吸光值。

2、按照蛋白濃度計算

單位定義：每mg 組織蛋白每分鐘催化水解 1μg 蔗糖定義為一個酶活力單位。

蔗糖酶活力(μg/min/mg prot)=[1000×(ΔA+0.12)÷0.1296×V1]÷(V1×Cpr)÷T=771×(ΔA +0.12)÷Cpr。

3、按樣本鮮重計算

單位定義：每g 組織每分鐘催化水解 1μg 蔗糖定義為一個酶活力單位。

蔗糖酶活力(μg/min/g 鮮重)=[1000×(ΔA+0.12)÷0.1296×V1]÷(W×V1÷V2)÷T=771×(ΔA +0.12) ÷W。

1000：1mg/ml=1000μg/ml；V1：加入反應體系中樣本體積，0.03ml；V2：加入提取液體積，1ml；T：反應時間，10min； Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/ml；W：樣本鮮重，g。

b. 用 96 孔板測定的計算公式如下

1、標準條件下測定的回歸方程為 y = 0.0648x -0.12；x 為標準品濃度（mg/ml），y 為吸光值。

2、按照蛋白濃度計算

單位定義：每mg 組織蛋白每分鐘催化水解 1μg 蔗糖定義為一個酶活力單位。

蔗糖酶活力(μg/min/mg prot)=[1000×(ΔA+0.12)÷0.0648×V1]÷(V1×Cpr)÷T=1542×(ΔA +0.12)÷Cpr。

3、按樣本鮮重計算

單位的定義：每g 組織每分鐘催化水解 1μg 蔗糖定義為一個酶活力單位。

蔗糖酶活力(μg/min/g 鮮重)=[1000×(ΔA+0.12)÷0.0648×V1]÷(W×V1÷V2)÷T=1543×(ΔA +0.12) ÷W。

1000：1mg/ml=1000μg/ml；V1：加入反應體系中樣本體積，0.03ml；V2：加入提取液體積，1ml；T：反應時間，10min； Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/ml；W：樣本鮮重，g。

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