支鏈淀粉含量試劑盒

（ 微量法 100T/96S）

正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定測定意義：

支鏈淀粉是具有高度分支的多糖，淀粉中直鏈淀粉和支鏈淀粉的比例和含量對淀粉產品的加工、物化特性、糊化溫度等有著直接的影響，對于不同比例直、支鏈淀粉的淀粉的研究具有重要的意義。

測定原理：

利用 80％乙醇可以把樣品中可溶性糖與淀粉分開，利用雙波長比色法測定支鏈淀粉含量。

支鏈淀粉含量試劑盒   淀粉系列-常備現貨

組成：

自備儀器和用品：

酶標儀/可見分光光度計、水浴鍋、可調式移液器、96 孔板/微量石英比色皿、研缽、冰、yi醚和蒸餾水。

淀粉提取：

稱取 0.01~0.02g 烘干樣本（建議稱取約 0.01g）于研缽中研碎，加入 1mL 試劑一，充分勻漿后轉移到 EP 管中，80℃水浴提取 30min，3000g，25℃離心 5min，棄上清，留沉淀，加入 1mL 試劑二（yi醚）振蕩 5min，3000g，25℃離心 5min，棄上清，留沉淀，加入 1mL 試劑三充分溶解，90℃水浴 10min，冷卻后待測。

測定步驟：

分光光度計或酶標儀預熱 30min 以上，蒸餾水調零。

測定管：在 96 孔板或微量石英比色皿中依次加入 20uL 樣本， 14uL 試劑四，120uL 蒸餾水，2uL 試劑五，44uL 蒸餾水，混勻，分別測定 550 和 743nm 處吸光值，ΔA 測定=A550-A743。

空白管：在 96 孔板或微量石英比色皿中依次加入 20uL 試劑三， 14uL 試劑四，120uL 蒸餾水，2uL試劑五，44uL 蒸餾水，混勻，分別測定 550 和 743nm 處吸光值，ΔA 空白=A550-A743。

支鏈淀粉含量計算：

a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下

標準條件下測定的回歸方程為y=0.1214x+0.0076；x 為標準品濃度（mg/mL），y 為吸光值。

1、按照蛋白濃度計算

支鏈淀粉含量(mg/mg prot)=[(ΔA 測定-ΔA 空白-0.0076)×V1]÷0.1214 ÷(V1×Cpr)=8.24×(ΔA 測定-ΔA 空白-0.0076) ÷Cpr

2、按樣本干重計算

支鏈淀粉含量(mg/g 干重)= [(ΔA 測定-ΔA 空白-0.0076)×V1] ÷0.1214÷(W×V1÷V2) =8.24×(ΔA 測定-ΔA 空白-0.0076) ÷W

V1：加入反應體系中樣本體積，0.02mL；V2：加入提取液體積，1 mL；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL； W：樣本質量，g

b. 用 96 孔板測定的計算公式如下

標準條件下測定的回歸方程為y= 0.0607x+0.0076；x 為標準品濃度（mg/mL），y 為吸光值。

1、按照蛋白濃度計算

支鏈淀粉含量(mg/mg prot)=[(ΔA 測定-ΔA 空白-0.0076)×V1]÷0.0607 ÷(V1×Cpr)=16.47×(ΔA 測定-ΔA空白-0.0076) ÷Cpr

2、按樣本干重計算

支鏈淀粉含量(mg/g 干重)= [(ΔA 測定-ΔA 空白-0.0076)×V1] ÷0.0607÷(W×V1÷V2) =16.47×(ΔA 測定-ΔA 空白-0.0076) ÷W

V1：加入反應體系中樣本體積，0.02mL；V2：加入提取液體積，1 mL；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL； W：樣本質量，g

zui低檢測限為 10mg/g 干重或 0.1mg/mgprot。

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