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果實/種子總 RNA 提取試劑盒
Fruit / Seed Total RNA Mini Kit
果實/種子總RNA快速提取試劑盒
目錄號：91513
產品內容
產品成份 | 91513-50（50 次） |
裂解液 FSL | 50 ml |
裂解液 ARL | 25 ml |
去蛋白液 RW1 | 40 ml |
漂洗液 RW | 10 ml（需加入zhi定量無水乙chun） |
RNase-Free H2O | 5 ml |
gDNA 過濾器和收集管 | 50 套 |
RNA 吸附柱和收集管 | 50 套 |
RNase-Free 1.5ml 離心管 | 50 支 |
保存條件
室溫（15 ~ 25℃），有效期 12 個月。
自備試劑
無水乙chun，β-巰基乙chun
具體產品的參數以收到產品說明書的參數為準
產品簡介
適用于快速提取果實、種子、中草藥的總 RNA，gDNA 過濾器能高效濾除 gDNA， RNA 可直接用于 RT、RT-PCR、RT-qPCR、普通轉錄組測序、RACE、芯片等。
成功案例：稻谷種子、玉米種子、小麥種子、葡萄果實、板栗、櫻桃、草莓、芒果、百合鱗莖、唐菖蒲的球莖、中草藥的塊根...
如果遇到果實、種子、中草藥，例如：多糖多酚巨高的作物種子（小麥/玉米/大豆/水稻）、葡萄果實、藍莓果實、百合鱗莖、土豆塊莖；或者次級代謝產物巨豐富的葛根、虎杖、雪蓮等藥用植物，請選擇 91513-果實種子總RNA 提取試劑盒。
產品特點
1. 高質：28s/18s=2:1，OD260/280=2.0～2.2！
2. 高效：提取全過程僅需 30min！
注意事項
1. 如果 FSL 有析出或者沉淀，請將其置于 65℃水浴中，重新溶解后使用。
2. 樣品應避免反復凍融，否則會影響 RNA 的提取得率和質量。
操作步驟：
重要提示：
① 第一次使用前請先在漂洗液 RW 中加入無水乙chun，加入量詳見瓶身標簽。
② 操作前，取 1ml 裂解液 FSL 至 2.0ml 離心管內，加入 5%的 β-巰基乙chun
（例如：1ml FSL 加 50μl β-巰基乙chun），顛倒混勻后，65℃水浴中預熱。多個樣本按比例放大準備。
③ β-巰基乙chun是裂解液 FSL 的關鍵成分，必要的時候可以提高終濃度到10～20%，來防止樣品褐化。如果碰到特別復雜的植物，可以嘗試在裂解液中再加入 PVP40 至終濃度 2%。
④ 所有離心步驟均需要在室溫（15℃～25℃）下進行。
1. 材料處理：
a．將植物樣本在液氮中迅速研磨成細粉。
b．轉移 30～200 mg 細粉至 65℃預熱的裂解液 FSL（已加有 β-巰基乙chun）中，立即劇烈渦旋震蕩 30 Sec，充分混勻。
注意：水分多的樣品（如草莓、西瓜果肉）投入 150～200 mg； 水分含量少的樣品（如成熟的小麥/玉米/大豆種子）投入 30～40 mg； 淀粉含量高的塊莖投入 40～80mg；葉片投入 50～100 mg。
c．短暫回放至 65℃水浴 5 min，中間偶爾顛倒 1～2 次，幫助裂解。
d．將裂解物 13,000 rpm 離心 5 ~10 min，沉淀不能裂解的碎片。
e．轉移上清（約 800~900 μl）至新的 2.0 ml 離心管中，加入 0.5 倍體積的無水乙chun（約 400~450 μl），吹打混勻。
2. 每次轉移≤750 μl 上清混合液至 gDNA 過濾器中（過濾器放入收集管），13,000 rpm 離心 2 min，倒棄濾液。重復此過程，直到混合液全部轉入gDNA 過濾器。此時，絕大部分 gDNA 被濾除，RNA和少量gDNA殘留被吸附在膜上。
3. 取出步驟2的gDNA過濾器，放入一個新的2.0 ml離心管中，加入500 μl 裂解液 ARL，13,000 rpm 離心 30 sec，收集濾液（RNA 在濾液中），向濾液中加入 250μl 無水乙chun，吹打混勻。
4. 將濾液混合物加入 RNA 吸附柱中，13,000 rpm 離心 2 min，倒棄濾液。此時，RNA 被吸附在膜上。
5. 加入700μl 去蛋白液 RW1，室溫放置1min，13,000 rpm 離心30sec，倒棄濾液。
6. 加入500μl 漂洗液 RW，13,000 rpm 離心 30 sec，倒棄濾液。
7. 重復步驟6一次。
8. 將RNA吸附柱放回空收集管中，13,000 rpm 離心2 min，除去膜上殘留的乙chun。
9. 取出RNA吸附柱，放入 RNase-free1.5 ml 離心管中，向 RNA 吸附膜的中央懸空滴加 30~50μl的RNase-free H2O，室溫放置 1 min，13,000 rpm 離心1min。
10. 提取的總 RNA，可直接用于下游實驗，或于-70℃保存，以免降解。
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