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諾博萊德 鏈霉蛋bai酶E PronaseE
鏈霉蛋bai酶E PronaseE 輔助試劑
產品貨號：P6148
產品名稱：鏈霉蛋bai酶E PronaseE
英文名稱：PronaseE
產品規格：250mg
產品簡介：
儲存條件：2-8℃，有效期1年
外觀(性狀)：白色至淺黃色粉末
酶活/效價：效價以實際標簽為準
具體產品的參數以收到產品說明書的參數為準
NobleRyderP6148 鏈霉蛋bai酶E PronaseE是一種非特異性蛋白水解酶。常用于提取DNA和RAN時蛋白消化；研究蛋白結構；從純化的糖蛋白中獲得糖肽等。
使用說明（以下操作內容來自公開文獻，僅供參考）：
消化蛋白
1. 儲存液制備：溶解于去離子水，配制成5-20mg/mL的PronaseE儲存液，若用于DNA或RNA分離步驟，建議將溶液56℃加熱處理15min，之后37℃孵育1h，此步驟能促使酶發生自消化，以去除DNase和RNase污染。之后將儲存液分成單次用量，-20℃凍存。
2. DNA分離：直接加入DNA制備體系（含有0.5-1%SDS以打破DNA-蛋白相互作用），典型Pronase E 工作濃度范圍250-500μg/mL，于37℃孵育1-4h。【注意：建議工作濃度范圍在250-2000μg/mL，依照具體情況而定】
3. 蛋白水解：溶解約0.2μM蛋白到0.2mL50mM碳酸氫銨緩沖液，pH8.0（或磷酸鹽緩沖液，pH7.0），之后按照1%（w/w）加入PronaseE，于37℃孵育24h。根據情況，有可能需要添加4%（w/w）氨肽酶M，并于37℃再孵育18h。
分離小鼠原代造血干細胞
1. 雄性或雌性小鼠被麻醉，并打開腹腔。
2. 肝臟經門靜脈灌注Hanks緩沖鹽溶液（HBSS），然后灌注PronaseE和膠原酶。
3. 用無菌鑷子輕輕取出肝臟，轉移到無菌培養皿中。將肝包膜分開，輕輕搖晃肝臟以釋放細胞。
4. 將細胞懸浮于含有PronaseE、膠原酶和DNase的溶液中，然后在37℃下消化20min。肝細胞經50g離心3min，兩輪分離。
5. 上清在450g下離心獲得造血干細胞8min，然后用18%尼基丹（Nycodenz）溶液懸浮沉淀，制備12%Nycodenz、8.2%Nycodenz 和Gey's 平yan鹽溶液（GBSS）密度梯度離心。
6. 最終，從8.2%的Nycodenz層中純化細胞，獲得造血干細胞。
注意事項：
1、一旦配成溶液，請分裝保存，避免反復凍融造成的產品失效。
2、 本產品僅供科研使用。請勿用于醫藥、臨床診斷或治療，食品及化妝品等用途。請勿存放于普通住宅區。
3、為了您的安全和健康，請穿好實驗服并佩戴一次性手套和口罩操作。
鏈霉蛋bai酶E PronaseE 輔助試劑
產品訂購信息
P6148 鏈霉蛋bai酶E PronaseE 250mg
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